艾文（贾斯汀·朗 Justin Long 配音）、喜多（杰西·麦卡尼 Jesse McCartney 配音）和塞门（马修·格雷·古柏勒 Matthew Gray Gubler 饰）是三只可爱的花栗鼠，它们一个拥有古灵精怪的头脑，一个拥有强壮坚实的体魄，一个拥有高超过人的智慧，感情十分要好的三人是亲密无间的好拍档。大卫（杰森·李 Jason Lee 饰）是三只小鼠的主人，近日里，他打算驱车前往迈阿密，那里居住着他深爱的女友，他要向她展开浪漫的求婚。然而，三只花栗鼠误会了主人的意思，以为艾文即将抛弃它们，不仅如此，它们还获悉，大卫的女友的儿子，是一个残暴的“恶魔”！为了阻挠大卫的求婚之旅，三只花栗鼠想出了一个天衣无缝的计划。
农场主贾森想要霸占埃尔多拉多的水源，于是派出了枪手科尔（约翰·韦恩 John Wayne 饰）前去赶走住在那里的麦克唐纳（R·G·阿姆斯特朗 R.G. Armstrong 饰）一家人。在前往埃尔多拉多的途中，科尔和自己的老友哈拉警长（罗伯特·米彻姆 Robert Mitchum 饰）重逢了，哈拉警长捅破了贾森的阴谋诡计，最终，科尔决定放弃执行这次非正义的任务。
一场意外中，科尔导致了麦克唐纳的儿子的死亡，宽容的麦克唐纳原谅了科尔的过失，但麦克唐纳的女儿却对其紧追不舍，发誓要为自己的手足报仇，最终，科尔决定离开埃尔多拉多。之后，科尔意外得知，贾森又派出了一名杀手前往麦克唐纳处，于是，他折返回了出发点，向麦克唐纳通风报信。
